酶標(biāo)儀

酶標(biāo)儀即酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的專用儀器又稱微孔板檢測(cè)器。可簡(jiǎn)單地分為半自動(dòng)和全自動(dòng)兩大類，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一個(gè)比色計(jì),即用比色法來進(jìn)行分析。 測(cè)定一般要求測(cè)試液的最終體積在250μL以下，用一般光電比色計(jì)無法完成測(cè)試，因此對(duì)酶標(biāo)儀中的光電比色計(jì)有特殊要求。

簡(jiǎn)介 

原理

酶標(biāo)儀實(shí)際上就是一臺(tái)變相光電比色計(jì)或分光光度計(jì)，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)基本相同。光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光，進(jìn)入塑料微孔板中的待測(cè)標(biāo)本。該單色光一部分被標(biāo)本吸收，另一部分則透過標(biāo)本照射到光電檢測(cè)器上，光電檢測(cè)器將這一待測(cè)標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號(hào)，電信號(hào)經(jīng)前置放大，對(duì)數(shù)放大，模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號(hào)處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算，最后由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果。微處理機(jī)還通過控制電路控制機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)X方向和Y方向的運(yùn)動(dòng)來移動(dòng)微孔板，從而實(shí)現(xiàn)自動(dòng)進(jìn)樣檢測(cè)過程。而另一些酶標(biāo)儀則是采用手工移動(dòng)微孔板進(jìn)行檢測(cè)，因此省去了X,Y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)和控制電路，從而使儀器更小巧，結(jié)構(gòu)也更簡(jiǎn)單。

微孔板是一種經(jīng)事先包埋專用于放置待測(cè)樣本的透明塑料板，板上有多排大小均勻一致的小孔，孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體，微孔板上每個(gè)小孔可盛放零點(diǎn)幾毫升的溶液。

光是電磁波，波長(zhǎng)100nm～400nm稱為紫外光，400nm～780nm之間的光可被人眼觀察到，大于780nm稱為紅外光。人們之所以能夠看到色彩，是因?yàn)楣庹丈涞轿矬w上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色，是因?yàn)橹参镂盏拇蟛糠譃榧t橙光和藍(lán)紫光，但對(duì)綠色不吸收，反射出來，所以植物呈現(xiàn)為綠色。酶標(biāo)儀測(cè)定的原理是在特定波長(zhǎng)下，檢測(cè)被測(cè)物的吸光值。

隨著檢測(cè)方式的發(fā)展，擁有多種檢測(cè)模式的單體臺(tái)式酶標(biāo)儀叫做多功能酶標(biāo)儀，可檢測(cè)吸光度（Abs)、熒光強(qiáng)度(FI)、時(shí)間分辨熒光（TRF)、熒光偏振（FP)、和化學(xué)發(fā)光（Lum)。

酶標(biāo)儀從原理上可以分為光柵型酶標(biāo)儀和濾光片型酶標(biāo)儀。光柵型酶標(biāo)儀可以截取光源波長(zhǎng)范圍內(nèi)的任意波長(zhǎng)，而濾光片型酶標(biāo)儀則根據(jù)選配的濾光片，只能截取特定波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)。

中心定位

儀器會(huì)自動(dòng)對(duì)酶標(biāo)孔進(jìn)行中心定位，中心定位是要消除酶標(biāo)孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測(cè)的不準(zhǔn)確。在對(duì)每一個(gè)酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，儀器其實(shí)要進(jìn)行35個(gè)點(diǎn)的測(cè)量，選取最中間的5個(gè)點(diǎn)的均值為本孔的OD值。

光源的參照通道

參照通道是用來校準(zhǔn)由于電壓不穩(wěn)或燈泡磨損帶來的影響。

用途和其它提示

用于ELISA試劑的測(cè)定，廣泛用于各種實(shí)驗(yàn)室，包括臨床實(shí)驗(yàn)室。

質(zhì)量控制

質(zhì)量控制是試劑檢測(cè)的重要因素。請(qǐng)按照試劑說明書的要求進(jìn)行質(zhì)量控制。

空白校正

有一些試劑盒的說明書將空白孔設(shè)置為空氣，其它大多數(shù)空白孔的設(shè)置是用試劑來設(shè)置的，請(qǐng)按照試劑盒的說明書要求進(jìn)行。

檢測(cè)結(jié)果的解釋

由于有相當(dāng)多的因素會(huì)影響檢測(cè)的結(jié)果，如不同的酶標(biāo)板，檢測(cè)試劑的體積，都會(huì)造成OD值的不同，因此，只有使用同一酶標(biāo)板反應(yīng)的試劑檢測(cè)結(jié)果才能比較和分析。對(duì)結(jié)果的臨床解釋請(qǐng)依照試劑盒的說明書進(jìn)行。

結(jié)構(gòu)

規(guī)格有24孔板，48孔板，96孔板等多種，不同的儀器選用不同規(guī)格的孔板，對(duì)其可進(jìn)行一孔一孔地檢測(cè)或一排一排地檢測(cè)。

酶標(biāo)儀所用的單色光既可通過相干濾光片來獲得，也可用分光光度計(jì)相同的單色器來得到.在使用濾光片作濾波裝置時(shí)與普通比色計(jì)一樣，濾光片即可放在微孔板的前面，也可放在微孔板的后面，聚光鏡，光欄后到達(dá)反射鏡，經(jīng)反射鏡作90°反射后垂直通過比色溶液,然后再經(jīng)濾光片送到光電管。

酶標(biāo)儀和普通的光電比色計(jì)有以下幾點(diǎn)差異：

（1）盛裝待測(cè)比色液的容器不再使用比色皿，而是使用塑料微孔板.微孔板常用透明的聚乙烯材料制成，對(duì)抗原抗體有較強(qiáng)的吸附作用，故用它作為固相載體。

（2）由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的，光線只能垂直穿過，因此酶標(biāo)儀的光束都是垂直通過待測(cè)溶液和微孔板的，光束既可是從上到下，也可以是從下到上穿過比色液。

（3）酶標(biāo)儀通常不僅用A，有時(shí)也使用光密度OD來表示吸光度.酶標(biāo)儀可分為單通道和多通道2種類型，單通道又有自動(dòng)和手動(dòng)2種之分.自動(dòng)型的儀器有X,Y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)，可將微孔板L的小孔一個(gè)個(gè)依次送入光束下面測(cè)試，手動(dòng)型則靠手工移動(dòng)微孔板來進(jìn)行測(cè)量。

在單通道酶標(biāo)儀的基礎(chǔ)上又發(fā)展了多通道酶標(biāo)儀，此類酶標(biāo)儀一般都是自動(dòng)化型的。它設(shè)有多個(gè)光束和多個(gè)光電檢測(cè)器，如 12個(gè)通道的儀器設(shè)有 12條光束或 12個(gè)光源，12個(gè)檢測(cè)器和12個(gè)放大器，在X方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)裝置的作用下，樣品12個(gè)為一排被檢測(cè).多通道酶標(biāo)儀的檢測(cè)速度快，但其結(jié)構(gòu)較復(fù)雜價(jià)格也較高。

用途

可廣泛應(yīng)用于低紫外區(qū)的DNA、RNA定量及純度分析（A260/A280）和蛋白定量（A280/BCA/Braford/Lowry），酶活、酶動(dòng)力學(xué)檢測(cè)，酶聯(lián)免疫測(cè)定（ELISAs），細(xì)胞增殖與毒性分析，細(xì)胞凋亡檢測(cè)（MTT），報(bào)告基因檢測(cè)及G蛋白偶聯(lián)受體分析（GPCR）等 [1] 。

選購指南 

酶標(biāo)儀（MicroplateReader）是對(duì)酶聯(lián)免疫檢測(cè)（EIA）實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行讀取和分析的專業(yè)儀器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)通過偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進(jìn)行的，反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示，通過顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標(biāo)本中待測(cè)抗體或抗原的濃度。

酶標(biāo)儀廣泛地應(yīng)用在臨床檢驗(yàn)、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中，由于大量的酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用，使得酶標(biāo)儀在生殖保健領(lǐng)域中應(yīng)用越來越廣泛，同時(shí)促進(jìn)了生殖健康技術(shù)水平提高。

國內(nèi)許多計(jì)生站系統(tǒng)開展了酶免檢測(cè)項(xiàng)目，如：乙肝五項(xiàng)、艾滋病檢測(cè)、優(yōu)生優(yōu)育系列檢測(cè)、激素檢測(cè)等。過去多數(shù)采用目測(cè)方法，報(bào)出的結(jié)果缺乏科學(xué)的依據(jù)。例如：某弓形蟲檢測(cè)試劑盒中，臨界值規(guī)定為：陰性對(duì)照品的OD值×2.5，通過目測(cè)無法判斷標(biāo)本孔的反應(yīng)顏色是否超過臨界值。肉眼進(jìn)行兩孔之間的顏色比較可能還行，但比較一孔的顏色是否超過另一孔顏色的2.5倍就不可能。

國內(nèi)多家權(quán)威機(jī)構(gòu)，如衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心和計(jì)劃生育系統(tǒng)等多次強(qiáng)調(diào)酶標(biāo)儀的重要性，并要求酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑應(yīng)使用酶標(biāo)儀判讀，酶免試劑的質(zhì)控也應(yīng)使用酶標(biāo)儀，并提供酶標(biāo)儀測(cè)定的原始數(shù)據(jù)，而各廠家的試劑盒說明書沒有是讓用目測(cè)的。同時(shí)酶免檢測(cè)的項(xiàng)目往往是一些實(shí)質(zhì)性的感染和病變（如：肝炎、艾滋病、優(yōu)生優(yōu)育等），判讀更要求嚴(yán)謹(jǐn)，由誤診引起的糾紛很難處理。另外，住院手術(shù)病人術(shù)前的丙肝、艾滋等EIA試劑檢測(cè)是避免因輸血引起感染引發(fā)的醫(yī)療事故糾紛的必要手段，正逐漸被許多單位所采用。

自檢校準(zhǔn) 

1.外觀

酶標(biāo)儀上應(yīng)有儀器名稱，型號(hào)，編號(hào)，生產(chǎn)廠家，出廠日期和電源電壓；各調(diào)節(jié)旋鈕，按鍵和開關(guān)均能正常工作，外表面無明顯機(jī)械損傷；顯示文字應(yīng)清楚完整。

2.酶標(biāo)儀的穩(wěn)定性(漂移)

選用492nm波長(zhǎng)，在吸光度0.0A處，測(cè)定標(biāo)稱值為1.0A的光譜中性濾光片(測(cè)定操作按儀器說明進(jìn)行)，記錄儀器示值或均值，10min后再次記錄儀器示值或均值，前后兩次測(cè)定值之差不應(yīng)超過±0．005A。

3.吸光度測(cè)定的準(zhǔn)確度

選用405，492和620 nm波長(zhǎng)，以空氣為參比，分別測(cè)定標(biāo)稱值為0.5和1.0A的光譜中性玻璃濾光片，用專用測(cè)試板代替酶標(biāo)板，按儀器說明連續(xù)測(cè)定3次，按下式計(jì)算準(zhǔn)確度：AA=1/3(A、+A。+A3)—A：(A：為標(biāo)準(zhǔn)值)。

4.吸光度測(cè)定的重復(fù)性

波長(zhǎng)選擇同(3)，在酶標(biāo)板第一排加注空白溶液，第二排加入濃度為200rig/ml的重鉻酸鉀溶液，重復(fù)測(cè)定5次。記錄每次測(cè)定的第二排吸光度值，取第二排任一孔吸光度值與各次對(duì)應(yīng)孔吸光度值。按下式計(jì)算重復(fù)性：

5.酶標(biāo)儀的線性

選用540nm波長(zhǎng)，將標(biāo)稱值0.5，1.0A中性濾光片分別放入專用測(cè)試板樣本位置中，以空氣為參比，各重復(fù)測(cè)定3次；然后將以上兩片中性濾光片疊加后置于專用測(cè)試板的同一孔位中，重復(fù)測(cè)定3次。

6.測(cè)定速度的檢定

選用492nm波長(zhǎng)，放入96孔酶標(biāo)板進(jìn)行測(cè)定，用秒表計(jì)測(cè)儀器打印出全部數(shù)據(jù)的時(shí)間。

酶標(biāo)儀除了在選購時(shí)，應(yīng)盡可能自檢外，在使用中也應(yīng)定期檢定，以保證酶標(biāo)儀測(cè)定的有效性 [1] 。

規(guī)格性能 

1.光學(xué)系統(tǒng)

光柵光路系統(tǒng)，包括內(nèi)建的參比檢測(cè)通道，確保任何測(cè)量情況下獲得一致的結(jié)果。

2.光路

長(zhǎng)壽命閃爍氙燈光源，光柵單色光發(fā)生器，200 ~1000 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)全波長(zhǎng)掃描，1nm步進(jìn)

3.檢測(cè)模式

在微孔板檢測(cè)模式和比色杯檢測(cè)模式下均可進(jìn)行全波長(zhǎng)范圍光譜掃描，對(duì)樣品和空白同時(shí)掃描。

4.光譜掃描速度

10s，200~1000nm，1nm步進(jìn)

5.樣品前處理

無需衍生處理，即可直接測(cè)定DNA、RNA和蛋白的吸光值。

6.光程校準(zhǔn)

使用微孔板檢測(cè)時(shí)可直接讀出OD值和濃度，對(duì)于水相溶液可使用光程校正

7.樣品容器

可使用96&384孔板，或標(biāo)準(zhǔn)杯/微量杯

8.帶寬

帶寬2.4nm

9.讀數(shù)范圍

0 ~ 4 OD

10.線性范圍

@450nm：0 ~ 2.5 Abs，±2%

11.檢測(cè)準(zhǔn)確度

@450nm：1%+0.003 Abs（0~2.0Abs），2%(2.0~2.5Abs）

12.檢測(cè)精度

@450nm <1.0% CV

13.檢測(cè)速度

8s/96孔；13s/384孔

14.溫控范圍

微孔板和比色杯模式均具溫控功能，溫控范圍（室溫+4)~ 65℃

15.振蕩模式

軌道，雙軌道和線性三種調(diào)速振蕩模式，動(dòng)力學(xué)過程中可執(zhí)行背景振蕩模式

16.數(shù)據(jù)處理及分析

通過PC端數(shù)據(jù)分析軟件Gen5進(jìn)行操作和設(shè)置：曲線擬合、定量分析、定性分析、動(dòng)力學(xué)計(jì)算、自定義方程以、平行線分析（PLA，符合歐盟法規(guī)要求）及效價(jià)分析等。數(shù)據(jù)可一鍵導(dǎo)出到Excel，也可生成詳盡的結(jié)果報(bào)告。

17.電源

電源輸入 100 - 240 V (50/60 Hz），最大功率消耗 90W

18.體積

外部尺寸（H x W x D) 216 x 216 x 406mm

19.重量

11kg

20.配置

全波長(zhǎng)讀數(shù)儀一套（含比色杯基座）（比色皿必須為立式），標(biāo)準(zhǔn)96孔酶標(biāo)板一包，電源線壹根，說明書一份，軟件光盤一張。

操作注意事項(xiàng) 

酶標(biāo)儀的功能是用來讀取酶聯(lián)免疫試劑盒的反應(yīng)結(jié)果，因此要得到準(zhǔn)確結(jié)果，試劑盒的使用必須規(guī)范。許多醫(yī)院在使用酶標(biāo)儀之前是通過目測(cè)判斷結(jié)果，操作過程隨意性較大，在使用酶標(biāo)儀后如果不能及時(shí)糾正操作習(xí)慣，會(huì)造成較大誤差。在酶標(biāo)儀的操作中應(yīng)注意以下事項(xiàng)：

1.使用加液器加液，加液頭不能混用。

2.洗板要洗干凈。如果條件允許，使用洗板機(jī)洗板，避免交叉污染。

3.嚴(yán)格按照試劑盒的說明書操作，反應(yīng)時(shí)間準(zhǔn)確。

4.在測(cè)量過程中，請(qǐng)勿碰酶標(biāo)板，以防酶標(biāo)板傳送時(shí)擠傷操作人員的手。

5.請(qǐng)勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部，操作完成后請(qǐng)洗手。

6.如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)危害，請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒的操作說明，以防對(duì)操作人員造成損害。

7.如果儀器接觸過污染性或傳染性物品，請(qǐng)進(jìn)行清洗和消毒。

8.不要在測(cè)量過程中關(guān)閉電源。

9.對(duì)于因試劑盒問題造成的測(cè)量結(jié)果的偏差，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況及時(shí)修改參數(shù)，以達(dá)到最佳效果。

10.使用后蓋好防塵罩。

11.出現(xiàn)技術(shù)故障時(shí)應(yīng)及時(shí)與廠家聯(lián)系，切勿擅自拆卸酶標(biāo)儀