來源: 網(wǎng)絡(luò) 2024-09-04
1. Sanger測序（鏈終止測序）
工作原理：
DNA復(fù)制：首先，將待測序的DNA片段通過PCR（聚合酶鏈反應(yīng)）擴(kuò)增。
終止子添加：在DNA復(fù)制過程中，使用帶有不同終止子的核苷酸（ddNTPs）。
鏈終止：當(dāng)ddNTPs加入時，DNA鏈的合成終止，因為它們沒有3羥基，不能與下一個核苷酸連接。
電泳分離：將所有新合成的DNA鏈進(jìn)行電泳分離。
讀取序列：通過檢測每個DNA鏈的終止點，可以確定每個核苷酸的序列。
2. 測序通量測序（二代測序）
工作原理：
片段化：將DNA片段化成小片段。
文庫構(gòu)建：將片段化的DNA連接到適配體上，形成文庫。
并行測序：使用熒光標(biāo)記的核苷酸進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并在每個循環(huán)中讀取序列。
序列讀取：通過檢測熒光信號的變化來確定每個核苷酸。
常見的二代測序技術(shù)包括：
Illumina測序：基于測序通量，使用測序芯片，通過熒光信號讀取序列。
ABI SOLiD測序：使用合成測序，通過檢測化學(xué)信號讀取序列。
Ion Torrent測序：使用半導(dǎo)體傳感器，通過檢測離子流讀取序列。
3. 單分子測序（三代測序）
工作原理：
單分子檢測：直接在單個DNA分子上進(jìn)行測序，而不是像二代測序那樣先進(jìn)行片段化。
實時監(jiān)測：在DNA復(fù)制或合成過程中實時監(jiān)測，可以同時讀取多個堿基。
信號檢測：通過檢測熒光信號或離子流等來讀取序列。
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